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        氯霉素是一種抑菌性廣譜抗生素，常被用于畜禽動物及水產品的疾病治療和預防；甲硝唑為硝基咪唑類藥物，常被加入動物飼料中以驅除動物體內的寄生蟲，因而造成動物源性食品中的藥物殘留。我國農業(yè)部第235號公告中已將甲硝唑和氯霉素列為不得檢出藥物，并規(guī)定了其他藥物的殘留*。
       目前檢測甲硝唑、氯霉素類藥物方法很多，但由于甲硝唑、氟苯尼考胺和氯霉素的性質差異比較大，同時檢測的方法很少。迪馬科技在參考各種標準和文獻基礎上，建立了SPE-UPLC -MS/MS法測定雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯霉素類獸藥殘留，采用90% 乙腈水提取，ProElut DPC-2固相萃取柱凈化樣品，收集流出液，Leapsil C18色譜柱分離檢測。方法特點如下：
1）前處理步驟少，提取液直接通過凈化柱接收流出液即可；
2）有機溶劑消耗量小，前處理過程中也無需使用酸堿試劑；
3）使用ProElut DPC-2凈化柱能夠有效的除掉雜質，凈化效果優(yōu)異；
4）分析條件簡單，可以一個流動相正負離子同時檢測，大大提高工作效率，減少實驗成本；
5）方法定量限是0.5 μg/kg。
以下為詳細解決方案，敬請參考！

雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯霉素類藥物殘留的檢測SPE-UPLC-MS/MS法

1、適用范圍
本方案適用于雞肉和雞蛋中甲硝唑、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢測。

2、標準品配制

(1) 單標儲備液1.0 μg/mL：準確稱取適量各標準品，用甲醇配制成1.0 μg/mL的單標儲備液；
(2) 混標儲備液200 μg/L：分別吸取各單標儲備液，用乙腈配制成200 μg/L混標儲備液；
(3) 混標中間液20 μg/L：準確吸取適量混標儲備液200 μg/L，用乙腈配制成20 μg/L的混標中間液。

3、提取

(1) 取5.0 g樣品，加入20 mL 90% 乙腈水溶液，振蕩5 min，超聲5 min，6000 rpm離心
2 min，取出上清液；
(2) 向上清液中加入10 mL乙腈飽和正己烷溶液，振蕩2 min，6000 rpm離心2 min，取下層清液約10 mL，待凈化。(雞蛋樣品加入正己烷后離心后可能會有果凍層，可以先將澄清的正己烷層吸去，然后混勻再離心)

4、凈化—— ProElut DPC-2 12 mL (Cat#: 65940)

小柱不需要活化，取10 mL待凈化液加入柱中，接收8 mL流出液；將接收的流出液在40 ℃水浴條件下氮吹至1 mL以下即可，用水定容至1 mL，過微孔濾膜(Nylon)上機分析。
注：同方法制備基質匹配標準溶液。

5、分析條件

UPLC 條件
色譜柱：Leapsil C18, 100 x 2.1 mm, 2.7 μm (Cat#：86005)
流  速：0.3 mL/min   
進樣量：10 μL  
柱  溫：40 ℃
流動相：A: 10 mmol/L乙酸銨       B: 乙腈

梯度設置

質譜條件

電離模式：ESI                                    掃描方式：正/負離子掃描
檢測方式：                                         多反應監(jiān)測 電噴霧電壓：5500 V/-4500 V
霧化氣壓力：50 psi                            輔助氣壓力：50 psi
氣簾氣壓力：20 psi                            離子源溫度：500 ℃

定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表

6、添加回收結果

雞蛋中甲硝唑和氯霉素類檢測的添加回收結果（%）

雞肉中甲硝唑和氯霉素類檢測的添加回收結果（%）

雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5 種獸藥檢測基質匹配標準品1.0 μg/L 的XIC 圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）

添加水平為0.5 μg/kg雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）

雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測基質匹配標準品10.0 μg/L的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）

添加水平為5.0 μg/kg雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）

雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測基質匹配標準品1.0 μg/L的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）

添加水平為0.5 μg/kg雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）

雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測基質匹配標準品10.0 μg/L的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）

添加水平為5.0 μg/kg雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測的XIC圖
（從左到右，從上到下依次是：甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）

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